对分子筛层析实验进行改革,优化分子筛层析分离标准蛋白的实验条件、建立良好的标准曲线。以分子筛Sephacryl S-200HR作为层析填料,对蛋白、蛋白浓度、样品上样量、上样顺序、流速等关键因素和环节进行了摸索,通过实验条件的筛选和优化获得了线性关系较好的标准曲线和洗脱峰图谱。该方法具有较高的分辨率和重复性,为进一步研究层析技术奠定了基础,在本科生的实验教学中取得了良好教学效果各蛋白的洗脱曲线图２不同的上样量对分子筛层析分离的影响图３不同的流速对分子筛层析分离的影响４．４上样顺序分子筛层析装柱后首先用蓝色葡聚糖检测装柱的效果，如果蓝色葡聚糖在层析柱中是均匀的、流动的，出来的峰对称性也不错，则表明装柱成功，然后测定各个蛋白的洗脱体积。通过反复实验，发现可以把卵清蛋白和蓝葡聚糖混合上样、把γ－球蛋白和卵清蛋白混合上样、把牛血清白蛋白和细胞色素Ｃ混合上样，都能得到很好的分离效果，又可以节省时间实验条件的优化-数控滚圆机滚弧机折弯机张家港电动液压滚圆机滚弧机折弯机。上样顺序是：卵清蛋白和蓝葡聚糖混合液—γ－球蛋白和卵清蛋白混合液—牛血清白蛋白和细胞色素Ｃ混合液本文由公司网站滚圆机网站 转载中国知网整理! http://www.gunyuanjixie.com。或者先上样卵清蛋白和蓝葡聚糖混合液，等２个蛋白峰都出现后再上１０ｇ／Ｌ的γ－球蛋白，大约１．５ｈ后接着加入２０ｇ／Ｌ牛血清白蛋白和１００ｇ／Ｌ细胞色素Ｃ的混合液。这样安排既可以节省时间，又可以保证每个蛋白都能很好地分离。４．５标准曲线的制作各蛋白的分子量Ｍｒ及其洗脱体积Ｖｅ见表１。蓝色葡聚糖－２０００用来测定层析的外水体积Ｖ０。得到的Ｖｅ／Ｖ０－ｌｇＭｒ标准曲线见图４。曲线的线性关系较好，易于重复，可以用于后续的实验求未知蛋白的分子量。表１分子筛层析中得到的各参数标准液Ｍ分子筛层析得到的标准曲线清白蛋白质量浓度为２０ｇ／Ｌ、γ－球蛋白质量浓度为１０ｇ／Ｌ；细胞色素Ｃ质量浓度为１００ｇ／Ｌ；每个样品上样量为２００μＬ。在相同实验条件及参数设置情况下，４个本科生班级的学生做的分子筛层析标准曲线实验结果非常相近，曲线的重复性较好。５结语根据生物化学实验课的教学特点，结合专业背景和发展需求，对传统的、经典的分子筛层析实验进行了改革与改进，并重新设计了实验方案。引进了细胞色素Ｃ蛋白，建立了标准曲线所需的实验蛋白浓度，明显改进了分子筛标准曲线线性关系，将其用于实验教学，受到学生喜爱，具有较好的推广价值实验条件的优化-数控滚圆机滚弧机折弯机张家港电动液压滚圆机滚弧机折弯机本文由公司网站滚圆机网站 转载中国知网整理! http://www.gunyuanjixie.com